Ko tetahi o nga tino painga o te ahurea pūtau ko te kaha ki te raweke i te matū-a-tinana o te whakaputa uri pūtau (ara te pāmahana, te pH, te pehanga osmotic, te ahotea O2 me te CO2) me te taiao ahupūngao (arā, te hormone me te kukū matūkai).I tua atu i te wera, ko te taiao ahurea e whakahaerehia ana e te tipu tipu.
Ahakoa ko te taiao-a-tinana o te ahurea kaore i te tino marama ki tona taiao-a-tinana me te taiao matū, he pai ake te mohio ki nga waahanga serum, te tautuhi i nga mea tipu e hiahiatia ana mo te tipu, me te pai ake o te mohio ki te taiao moroiti o nga pūtau i roto i te ahurea.(Arā, te taunekeneke pūtau-pūtau, te whakamaarama hau, te taunekeneke me te matrix) ka taea e etahi raina pūtau te whakatipu i roto i nga papaaho kore-serum.
1.Ko te taiao ahurea ka pa ki te tipu o te pūtau
Kia mahara he rereke nga ahuatanga o te ahurea pūtau mo ia momo pūtau.
Ko nga hua o te kotiti atu i nga tikanga ahurea e hiahiatia ana mo tetahi momo momo pūtau mai i te whakaputanga o nga tohu ahua rereke ki te kore rawa o te ahurea pūtau.Na reira, ka tūtohu matou kia mohio koe ki te raina pūtau e hiahia ana koe me te whai i nga tohutohu e whakaratohia ana mo ia hua ka whakamahia e koe i roto i to whakamatautau.
2.Whakatupatotanga mo te hanga i tetahi taiao ahurea pūtau kua arotau mo o pūtau:
Paapaa ahurea me te serum (tirohia ki raro mo etahi atu korero)
Te taumata pH me te CO2 (tirohia ki raro mo etahi atu korero)
Whakakiia te kirihou (tirohia ki raro mo etahi atu korero)
Te pāmahana (tirohia ki raro mo etahi atu korero)
2.1 Tikanga Ahurea me te Serum
Ko te tikanga ahurea te waahanga nui o te taiao ahurea, na te mea e whakarato ana i nga matūkai, nga mea tipu me nga homoni e hiahiatia ana mo te tipu o te pūtau, me te whakarite i te pH me te pehanga osmotic o te ahurea.
Ahakoa i mahia nga whakamatautau ahurea o nga pūtau tuatahi ma te whakamahi i nga papaaho taiao i puta mai i nga tangohanga kiko me nga wai o te tinana, na te hiahia mo te paerewa paerewa, te kounga o te papapāho, me te piki haere o te hiahia i ahu mai te whakawhanaketanga o te hunga pāpāho tino.Ko nga momo papaaapapa e toru ko te paanui papaa, ko te paoho serum whakaheke me te paanui kore-serum, a he rereke nga whakaritenga mo te taapiri serum.
2.1.1 Waenga taketake
Waenga ahurea pūtau Gibco
Ko te nuinga o nga raina pūtau e tipu pai ana i roto i nga papaaho taketake kei roto nga waikawa amino, huaora, tote parakore, me nga puna waro (pērā i te kūhuka), engari me taapiri enei hanganga pāpāho taketake ki te serum.
2.1.2 Whakaitihia te reo serum
Pounamu me Gibco Low Serum Waenga
Ko tetahi atu rautaki ki te whakaheke i nga paanga kino o te serum i roto i nga whakamatautau ahurea pūtau ko te whakamahi i nga paanui whakaheke-serum.Ko te reo whakaheke serum he tikanga taketake e whai kiko ana i nga matūkai me nga mea i ahu mai i nga kararehe, ka taea te whakaiti i te nui o te serum e hiahiatia ana.
2.1.3 Serum-kore reo
Pounamu me te reo kore-serum Gibco
Ko te Serum-free medium (SFM) ka takahi i te whakamahinga o te serum kararehe ma te whakakapi i te serum ki te kai tika me te hanga homoni.He maha nga ahurea tuatahi me nga raina pūtau he hangahanga reo kore-serum, tae atu ki te Hainamana Hamster Ovary (CHO) raina hanga pūmua recombinant, momo raina pūtau hybridoma, raina pepeke Sf9 me Sf21 (Spodoptera frugiperda), me mo te Kaihautu mo te whakaputa huaketo. (hei tauira, 293, VERO, MDCK, MDBK), me etahi atu. Ko tetahi o nga painga nui o te whakamahi i te reo kore-serum ko te kaha ki te whiriwhiri i te reo mo nga momo pūtau motuhake ma te whiriwhiri i te huinga tika o nga mea tipu.Ko te ripanga e whai ake nei e whakaatu ana i nga painga me nga ngoikoretanga o te pāpāho kore-serum.
Painga
Whakanuia te marama
He rite tonu te mahi
He ngawari ake te purenga me te tukatuka o raro
Aromatawai tika i te mahi o te pūtau
Whakanuia te hua
He pai ake te whakahaere i nga tauhohenga whaiaroaro
Kua whakanikohia te rapunga pāpāho pūtau
Te kino
Momo pūtau ngā whakaritenga tātai reo motuhake
Me teitei ake te pure reagent
Te puhoi o te tipu
2.2.1 taumata pH
He pai te tipu o te nuinga o nga raina pūtau whakangote i te pH 7.4, a he iti nga rereketanga i waenga i nga raina pūtau rereke.Heoi ano, kua kitea he pai ake te tipu o etahi raina pūtau kua whakarereketia i roto i te taiao paku waikawa (pH 7.0 – 7.4), engari ko etahi o nga raina pūtau fibroblast e pai ana ki te taiao paku kawakore (pH 7.4 – 7.7).Ko nga raina pūtau pepeke penei i te Sf9 me Sf21 ka tipu pai ki te pH 6.2.
2.2.2 taumata CO2
Ko te tikanga tipu ka whakahaere i te pH o te ahurea me te aukati i nga pūtau o te ahurea ki te aukati i nga huringa o te pH.I te nuinga o te wa, ka tutuki tenei maataki ma te whakauru i nga kaiao (hei tauira, HEPES) me nga parapara-a-CO2-bicarbonate.Na te mea ka whakawhirinaki te pH o te reo i runga i te toenga ngawari o te waro hauhā (CO2) me te bicarbonate (HCO3-), ka huri nga huringa o te CO2 hau i te pH o te reo.Na reira, ka whakamahi i te reo karekau me te whakahiato i runga i te CO2-bicarbonate, he mea tika ki te whakamahi i te CO2 o waho, ina koa ka whakatipu nga pūtau i roto i nga rihi ahurea tuwhera, te whakatipu ranei i nga raina pūtau kua huri i nga taumata teitei.Ahakoa te nuinga o nga kairangahau e whakamahi ana i te 5-7% CO2 i te rangi, ko te nuinga o nga whakamatautau ahurea pūtau e whakamahi ana i te 4-10% CO2.Heoi ano, kei ia reo he whakamaarama CO2 me te kukū bicarbonate hei whakatutuki i te pH tika me te pehanga osmotic;mo etahi atu korero, tirohia nga tohutohu a te kaihanga reo.
2.3 Te whakatipu kirihou
E wātea ana nga kirihou ahurea pūtau i roto i te maha o nga ahua, te rahi me nga papa kia pai ki nga momo tono ahurea pūtau.Whakamahia te aratohu mata kirihou ahurea pūtau me te aratohu ipu ahurea pūtau kei raro hei awhina i a koe ki te whiriwhiri i te kirihou tika mo to tono ahurea pūtau.
Tirohia nga kirihou ahurea pūtau Thermo Scientific Nunc katoa (hono panui)
2.4 Te pāmahana
Ko te pāmahana tino pai mo te ahurea pūtau e whakawhirinaki nui ana ki te mahana o te tinana o te kaihautu i wehea ai nga pūtau, me te iti ake ki nga huringa tinana o te pāmahana (hei tauira, he iti ake te pāmahana o te kiri i to te uaua koiwi. ).Mo te ahurea pūtau, Ko te whakawera he raru nui atu i te wera.Na reira, ko te pāmahana i roto i te incubator te nuinga o te waa ka whakatakotoria ki raro iho i te pāmahana tino pai.
2.4.1 Te pāmahana tino pai mo nga momo raina pūtau
Ko te nuinga o nga raina pūtau tangata me te whakangote ka pupuri i te 36°C ki te 37°C mo te tipu pai.
Ka whakatipuhia nga pūtau pepeke ki te 27°C mo te tipu pai;ka puhoi ake te tipu ki te iti o te mahana me te mahana i waenga i te 27°C ki te 30°C.I runga ake i te 30°C, ka heke te ora o nga pūtau pepeke, ahakoa ka hoki ki te 27°C, e kore e ora ake nga ruma.
Me 38.5°C te 38.5°C kia eke ki te tipu teitei.Ahakoa ka taea te pupuri i enei pūtau ki te 37°C, ka puhoi ake te tipu.
Ka taea e nga raina pūtau i ahu mai i nga kararehe toto makariri (pērā i te amphibians, ika wai makariri) ka aro ki te whānuitanga o te pāmahana o te 15°C ki te 26°C.
Wā tuku: Feb-01-2023